M-MLV Neoscript Reverse Transcriptase

ʻO Neoscript Reverse Transcriptase kahi transcriptase hoʻohuli i loaʻa ma ka nānā ʻana i ka mutation o ka M-MLV gene o Moloney murine leukemia virus kumu a me ka ʻōlelo ma E.coli.Hoʻopau ka enzyme i ka hana RNase H, ʻoi aku ka kiʻekiʻe o ka mahana wela, a kūpono no ka transcription hoʻohuli kiʻekiʻe.No laila, he mea kōkua no ka hoʻopau ʻana i nā hopena maikaʻi ʻole o ka hoʻolālā kiʻekiʻe kiʻekiʻe o RNA a me nā mea kikoʻī ʻole ma ka cDNA synthesis, a ʻoi aku ka kiʻekiʻe o ke kūpaʻa a me ka hoʻohuli ʻana i ka hiki ʻana i ka synthesis transcription.ʻOi aku ka paʻa o ka enzyme a me ka hiki ke hoʻololi i ka transcription synthesis.

Nā ʻāpana

1.200 U/μL Neoscript Reverse Transcriptase

2.5 × Hoʻopaʻa Kau-Akahi (koe)

* 5 × First-Strand Buffer ʻaʻohe dNTP, e ʻoluʻolu e hoʻohui i nā dNTP i ka wā e hoʻomākaukau ai i ka ʻōnaehana pane

Manaʻo Noi

1.Hoʻokahi ʻanuʻu qRT-PCR.

2.ʻIke maʻi RNA.

Kūlana Waihona

-20°C no ka mālama ʻana i ka wā lōʻihi, pono e hui pū ʻia ma mua o ka hoʻohana ʻana, e pale i ka hoʻoheheʻe pinepine ʻana.

Wehewehe Unite

Hoʻokomo ʻia kekahi ʻāpana i 1 nmol o dTTP i 10 mau minuke ma 37°C me ka hoʻohana ʻana i ka poly(A)•oligo(dT)₂₅ma ke ʻano he laʻana/primer.

Ka Mana Mana

1.ʻOi aku ka maʻemaʻe electrophoretic SDS-PAGE ma mua o 98%.

2.Ka hoʻonui ʻana i ka naʻau, ka hoʻomalu ʻana i ka pūʻulu, kūpaʻa.

3.ʻAʻohe hana nuclease exogenous, ʻaʻohe exogenous endonuclease a exonuclease contamination

Hoʻonohonoho hoʻonohonoho no ka hoʻonā ʻana o ke kaulahao mua

1.Ka hoʻomākaukau ʻana i ka hui ʻana

Nā memo:a/b: E ʻoluʻolu e koho i nā ʻano kumu mua e like me kāu mau pono hoʻokolohua.

2.E wela ma 65°C no 5 mau minuke a hooluolu koke i ka hau no 2 mau minuke.

3.E hoʻohui i kēia mau ʻāpana i ka ʻōnaehana ma luna i ka nui o ka 20µL a hui mālie:

4. Eʻoluʻolu e hana i ka hopena e like me kēia mau kūlana:

(1) Inā hoʻohana ʻia ka Random Primer, pono e hoʻokō ʻia ka hopena ma 25 ℃ no 10mins, a laila ma 50 ℃ no 30 ~ 60mins;

(2) Inā hoʻohana ʻia ʻo Oligo dT a i ʻole nā ​​​​mea hoʻomaka kikoʻī, pono e hoʻokō ʻia ka hopena ma 50 ℃ no 30 ~ 60mins.

5.E wela ma 95 ℃ no 5 mau minuke e hoʻopau i ka Neoscript Reverse Transcriptase a hoʻopau i ka hopena.

6.Hiki ke hoʻohana pololei ʻia nā huahana transcription reverse i ka hopena PCR a me ka fluorescence quantitative PCR reaction, a i ʻole mālama ʻia ma -20 ℃ no ka manawa lōʻihi.

ʻO ka PCR Rhana:

1.Ka hoʻomākaukau ʻana i ka hui ʻana

Nā memo:a: Inā ʻoi aku ka nui o ka hopena o ke kaulahao mua i hoʻohui ʻia, hiki ke kāohi ʻia ka hopena PCR.

2.Ke Kaʻina Hana Hana PCR

Nā memo

1.He kūpono no ka hoʻololi ʻana i ka wela wela ma ka laulā o 42 ℃ ~ 55 ℃.

2.ʻOi aku ka maikaʻi o ke kūpaʻa, kūpono no ka hoʻonui ʻana i ka transcription reverse kiʻekiʻe.Eia kekahi, maikaʻi ia no ka hele pono ʻana i nā wahi paʻakikī o RNA.Eia kekahi, ʻo iaHe kūpono ia no ka ʻike ʻana i ka RT-PCR i hoʻokahi ʻanuʻu multiplex fluorescence quantitative.

3.ʻO ka hoʻohālikelike maikaʻi me nā enzymes amplification PCR like ʻole a kūpono i nā hopena RT-PCR sensitivity kiʻekiʻe.

4.He kūpono no ke kiʻekiʻe sensitivity one-step fluorescence quantitative RT-PCR reaction, hoʻomaikaʻi maikaʻi i ka helu ʻike o ka haʻahaʻa haʻahaʻa o nā template.

5.He kūpono no ke kūkulu hale waihona cDNA.