Kit Genotyping Mouse

Helu popoki: HCR2021A

ʻO kēia huahana he kit i hoʻolālā ʻia no ka ʻike wikiwiki ʻana i nā genotypes ʻiole, e komo pū ana me ka ʻili ʻana o DNA crude a me ka PCR amplification system.Hiki ke hoʻohana ʻia ka huahana no ka hoʻonui ʻana i ka PCR mai ka huelo ʻiole, ka pepeiao, ka manamana wāwae a me nā ʻiʻo ʻē aʻe ma hope o ka hoʻokaʻawale maʻalahi e Lysis Buffer a me Proteinase k.ʻAʻole hoʻoheheʻe ʻia i ka pō, ʻoki ʻana i ka phenol-chloroform a i ʻole ka hoʻomaʻemaʻe kolamu, he mea maʻalahi a pōkole ka manawa o nā hoʻokolohua.Ua kūpono ka huahana no ka hoʻonui ʻana i nā ʻāpana ʻāpana a hiki i ka 2kb a me nā hopena PCR multiplex a hiki i 3 mau pālua o nā primers.Aia ka 2×Mouse Tissue Direct PCR Mix i loko o ka genetically engineered DNA polymerase, Mg²⁺, dNTPs a me kahi ʻōnaehana pale i hoʻopaʻa ʻia e hāʻawi i ka maikaʻi hoʻonui kiʻekiʻe a me ka hoʻomanawanui ʻana, i hiki ke hoʻokō ʻia nā hopena PCR ma o ka hoʻohui ʻana i nā templates a me nā primers a me ka rehydrating i ka huahana i 1 ×.ʻO ka huahana PCR i hoʻonui ʻia me kēia huahana he kumu "A" koʻikoʻi ma ka hopena 3′ a hiki ke hoʻohana pololei ʻia no ka hoʻopili ʻana o TA ma hope o ka hoʻomaʻemaʻe ʻana.

Nā ʻāpana

Nā Kūlana Waihona

Pono e mālama ʻia nā huahana ma -25 ~ -15 ℃ no 2 mau makahiki.Ma hope o ka hoʻoheheʻe ʻana, hiki ke mālama ʻia ʻo Lysis Buffer ma 2 ~ 8 ℃ no ka hoʻohana ʻana i ka manawa pōkole, a hui maikaʻi i ka wā e hoʻohana ai.

Palapala noi

He kūpono kēia huahana no ka nānā ʻana i ka ʻiole knockout, transgenic detection, genotyping a pēlā aku.

Nā hiʻohiʻona

1.Ka hana maʻalahi: ʻaʻole pono e unuhi i ka DNA genomic;

2.Ka hoʻohana ākea: kūpono no ka hoʻonui pololei ʻana i nā ʻiole like ʻole.

Nā kuhikuhi

1.Hoʻokuʻu i ka DNA genomic

1) Hoʻomākaukau i ka lysate

Hoʻomākaukau ʻia ka Tissue lysate e like me ka helu o nā ʻiole e hoʻoheheʻe ʻia (pono e hoʻomākaukau ʻia ka tissue lysate ma ka pūnaewele e like me ke ʻano a hui pū ʻia no ka hoʻohana ʻana), a penei ka nui o nā reagents i koi ʻia no kahi laʻana:

2) Hoʻomākaukau Laʻana a me Lysis

Hoʻohana ʻia ka Tissue

E lawe i ka nui kūpono o nā ʻiʻo ʻiole i loko o nā paipu centrifuge maʻemaʻe, e hoʻohui i 200μL o ka lysate kikokiko hou i kēlā me kēia pahu centrifuge, vortex a lulu, a laila e hoʻomoʻa ma 55 ℃ no 30mins, a laila wela ma 98 ℃ no 3mins.

3) Centrifugation

E lulu maikaʻi i ka lysate a me ka centrifuge ma 12,000 rpm no 5 mau minuke.Hiki ke hoʻohana ʻia ka supernatant ma ke ʻano he laʻana no ka PCR amplification.Inā makemake ʻia ke kumu no ka mālama ʻana, e hoʻoneʻe i ka supernatant i kahi paipu centrifuge sterile a mālama ma -20 ℃ no 2 pule.

2.Hoʻonui PCR

Wehe i ka 2×Mouse Tissue Direct PCR Mix mai -20 ℃ a hoʻoheheʻe i ka hau, hui i lalo a hoʻomākaukau i ka ʻōnaehana hopena PCR e like me ka papa aʻe (e hana me ka hau):

Nānā:

a) ʻAʻole pono ka nui i hoʻohui ʻia ma mua o 1/10 o ka ʻōnaehana, a inā i hoʻohui nui ʻia, hiki ke kāohi ʻia ka PCR amplification.

Manaʻo PCR Kūlana

Nānā:

a) Hoʻohui ʻia ka mahana: Me ka pili ʻana i ka waiwai Tm o ke kumu mua, ʻōlelo ʻia e hoʻonohonoho i ka mahana annealing i ka waiwai Tm liʻiliʻi o ke kumu + 3 ~ 5 ℃.

Nā pilikia maʻamau a me nā hoʻonā

1.ʻAʻohe ʻāpana i kuhikuhi ʻia

1) ʻO ka huahana lysis nui loa.E koho i ka nui kūpono o ka la'ana, 'a'ole ma mua o 1/10 o ka pūnaewele;

2) Nui loa ka laʻana.E hoʻoheheʻe i ka lysate 10 mau manawa a laila e hoʻonui, a i ʻole e hōʻemi i ka nui o ka laʻana a me ka re-lysis;

3) ʻAʻole hou nā hāpana kiko.Manaʻo ʻia e hoʻohana i nā ʻano kikoʻī hou;

4) ʻAʻole maikaʻi ke kumu mua.E hoʻohana i ka DNA genomic no ka hoʻonui ʻana e hōʻoia i ka maikaʻi kumu mua a e hoʻopololei i ka hoʻolālā kumu.

2.Hoʻonui kikoʻī ʻole

1) He haʻahaʻa loa ka mahana annealing a he kiʻekiʻe loa ka helu pōʻai.Hoʻonui i ka mahana annealing a hoʻemi i ka helu o nā pōʻai;

2) Kiʻekiʻe loa ka manaʻo o ka template.E ho'ēmi i ka nui o ka template a i ʻole e hoʻoheheʻe i ka template 10 mau manawa ma hope o ka hoʻonui ʻana;

3) ʻAʻohe kikoʻī kikoʻī.E hoʻonui i ka hoʻolālā mua.

Nā memo

1.I mea e pale aku ai i ka hoʻohaumia ʻana ma waena o nā laʻana, pono e hoʻomākaukau ʻia nā mea hana laʻana he nui, a hiki ke hoʻomaʻemaʻe ʻia ka ʻili o nā mea hana me ka 2% sodium hypochlorite solution a i ʻole nucleic acid cleaner ma hope o kēlā me kēia laʻana inā makemake ʻia ka hoʻohana pinepine ʻana.

2.Manaʻo ʻia e hoʻohana i nā ʻiole hou, a ʻaʻole nui ka nui o ka laʻana i ʻole e hoʻopilikia i nā hopena hoʻonui.

3.Pono ʻo Lysis Buffer e pale i ka hoʻoheheʻe pinepine ʻana, a hiki ke mālama ʻia ma 2 ~ 8 ℃ no ka hoʻohana nui ʻana i ka wā pōkole.Inā mālama ʻia ma ka wela haʻahaʻa, hiki mai ka ua, a pono e hoʻoheheʻe ʻia ma mua o ka hoʻohana ʻana.

4.Pono ʻo PCR Mix e pale i ka hoʻoheheʻe pinepine ʻana, a hiki ke mālama ʻia ma 4 ℃ no ka hoʻohana pinepine ʻana i ka wā pōkole.

5.No ka noiʻi hoʻokolohua ʻepekema wale nō kēia huahana a ʻaʻole pono e hoʻohana ʻia i ka maʻi lapaʻau a i ʻole ka mālama ʻana.