2×Rapid Taq Super Mix
Helu popoki: HCR2016A
Hoʻokumu ʻia ʻo 2×Rapid Taq Super Mix i ka Taq DNA Polymerase i hoʻololi ʻia, me ka hoʻohui ʻana i ka mea hoʻonui ikaika, ka mea hoʻonui hoʻonui a me ka ʻōnaehana buffer optimized, me ka hana hoʻonui kiʻekiʻe.ʻO ka wikiwiki o ka hoʻonui ʻana o nā mamana paʻakikī e like me ka genome i loko o 3 kb a hiki i ka 1-3 sec/kb, a ʻo ka wikiwiki o nā template maʻalahi e like me plasmids i loko o 5 kb a hiki i 1 sec/kb.Hiki i kēia huahana ke mālama nui i ka manawa hana PCR.Ma ka manawa like, loaʻa i ka mix dNTP a me Mg2+, hiki ke hoʻonui ʻia ma ka hoʻohui ʻana i nā primers a me nā templates, kahi e hoʻomaʻamaʻa nui ai i nā ʻanuʻu hana o ka hoʻokolohua.Eia kekahi, loaʻa i ka hui ka mea hoʻonaninani electrophoretic, hiki ke lilo i electrophoresis ma hope o ka hopena.ʻO ka mea pale i loko o kēia huahana e hoʻomau i ka hana paʻa ma hope o ka hoʻoheheʻe pinepine ʻana a me ka hoʻoheheʻe ʻana.Hiki ke hoʻopaʻa maʻalahi ʻia ka pahu 3'-hopena A o ka huahana PCR i ka vector T.
Nā ʻāpana
2×Rapid Taq Super Mix
Nā Kūlana Waihona
Pono e mālama ʻia nā huahana PCR Master Mix ma -25 ~ -15 ℃ no 2 mau makahiki.
Nā kikoʻī
| Hōʻike huahana | Rapid Taq Super Mix |
| Hoʻopaʻa | 2× |
| Hoomaka Wela | Hoʻomaka wela i kūkulu ʻia |
| Ke kau ʻana | 3′-A |
| Ka wikiwiki o ka pane | wikiwiki |
| Nui (Huahana Hope) | A hiki i 15 kb |
| Nā kūlana no ka lawe ʻana | Hau maloo |
Nā kuhikuhi
1. Pūnaehana Hana (50 μL)
| Nā ʻāpana | Nui (μL) |
| DNA template* | kūpono |
| Ka mua (10 μmol/L) | 2.5 |
| ʻO ke kumu mua (10 μmol/L) | 2.5 |
| 2×Rapid Taq Super Mix | 25 |
| ddH2O | i 50 |
2.Hoʻolaha Hoʻolaha
| Kaʻina kaʻapuni | Mahana (°C) | Manawa | Nā pōʻaiapuni |
| Predenaturation | 94 | 3 min | 1 |
| Denaturation | 94 | 10 sec |
28-35 |
| Hoʻopili | 60 | 20 sec | |
| Hoʻonui | 72 | 1-10 sec/kb |
Manaʻo ʻia ka hoʻohana ʻana i nā mamana like ʻole:
| ʻAno hoʻohālike | ʻĀpana hoʻohana ʻāpana (50 μL ʻōnaehana pane) |
| DNA Genomic a i ʻole E. coli wai | 10–1,000 ng |
| Plasmid a i ʻole DNA viral | 0.5-50 ng |
| cDNA | 1-5 µL (ʻaʻole ʻoi aku ma mua o 1/10 o ka nui o ka nui o ka hopena PCR) |
| Manaʻo ʻia ka hoʻohana ʻana i nā mamana like ʻole | |
Nā memo:
1.Hoʻohana Reagent: hoʻoheheʻe piha a hui pū ma mua o ka hoʻohana ʻana.
2. ʻO ka mahana hoʻohui: ʻO ka mahana hoʻopili ka waiwai Tm āpau, a hiki ke hoʻonohonoho ʻia i ka 1-2 ℃ haʻahaʻa ma mua o ka waiwai Tm primer.
3. Ka wikiwiki hoʻonui: E hoʻonoho i 1 sec/kb no nā mamana paʻakikī e like me genome a me E. coli i loko o 1 kb;hoʻonoho i 3 sec/kb no nā mamana paʻakikī e like me 1-3 kb genome a me E. coli;hoʻonoho i 10 sec/kb no nā laʻana paʻakikī ma luna o 3 kb genome a me E. coli.Hiki iā ʻoe ke hoʻonohonoho i ka waiwai i 1 sec/kb no kahi maʻalahi e like me ka plasmid ma lalo o 5 kb, 5 sec/kb no kahi maʻalahi e like me ka plasmid ma waena o 5 a me 10 kb, a me 10 sec/kb no kahi maʻalahi. e like me ka plasmid nui aʻe ma mua o 10 kb.
Nā memo
1. No kou palekana a me kou olakino, e ʻoluʻolu e ʻaʻahu i nā ʻaʻahu lab a me nā mīkina lima hoʻopau no ka hana.
2. No ka noiʻi WALE wale nō kēia huahana!
