Multiplex One Step RT-qPCR Premix-UNG
Helu popoki: HCB5145A
ʻO ka Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG Plus) kahi pahu PCR nui nui e pili ana i ka RNA ma ke ʻano hoʻohālike.I ke kaʻina hana o ka hoʻokolohua, ua hoʻokō ʻia ka transcription hoʻohuli a me ka PCR quantitative i loko o ka paipu hoʻokahi, ka mea i maʻalahi i ka hana hoʻokolohua a hōʻemi i ka hopena o ka haumia.I loko o kēia pahu, ua hana maikaʻi ʻia ke kaula cDNA mua e ka wela-resistant Reverse Transcriptase a hoʻonui nui ʻia e HotStart Tag DNA Polymerase.Aia i loko o ka pahu ka pahu MP i hoʻopaʻa ʻia, hui pū ʻia nā enzymes, a pēlā aku2+a me dNTP.Eia kekahi, ua hoʻohui ʻia nā mea e hiki ai ke pale pono i ka hoʻonui ʻana i ka PCR non-specific a hoʻomaikaʻi i ka hoʻonui ʻana i ka hoʻonui ʻana o nā hopena qPCR lehulehu, hiki ke hōʻoia i ka hoʻonui ʻana a hoʻokō i nā hopena amplification lehulehu.Ua hoʻohui ʻia ka ʻōnaehana dUTP/UDG i mea e pale pono ai i ka pilikia o ka ʻino aerosol.
Nā ʻāpana
1. Hoopaa
2. Huihui Enzyme
Hōʻike
| Hoomaka Wela | Hoʻomaka wela i kūkulu ʻia |
| ʻAno ʻike | ʻO ka ʻike maka mua |
| ʻano PCR | Hoʻokahi ʻanuʻu RT-qPCR |
| Polymerase | Taq DNA polymerase |
| ʻAno hāpana | DNA |
Nā Kūlana Waihona
Hoʻouna ʻia ka huahana me ka hau maloʻo a hiki ke mālama ʻia ma -25 ~ -15 ℃ no 1 makahiki.Pono e pale pinepinehoʻolū-hau.Manaʻo ʻia e mālama kaʻawale.
Nā kuhikuhi
1.Pane Pūnaehana
| Nā ʻāpana | Volume (μL) | Hoʻopaʻa hope |
| 2 × MP Buffer | 12.5 | 1× |
| Huihui Enzyme | 1 | - |
| Hui Pūmua/Probe (2.5 μM) | 3 | 0.3μM |
| Kāpena RNA | 1-10 | - |
| RNase Free H2O | i ka 25 | - |
Nā memo:
E ʻoluʻolu e hui maikaʻi ma mua o ka hoʻohana ʻana, e pale i nā ʻōpū nui i hoʻokumu ʻia e ka haʻalulu ikaika.
a.ʻO ke kumu kumu: ʻO ka hui mua me ka multiplex primer, ma muli o ke kūlana ʻoi aku ka maikaʻi o ka neʻe ʻana ma waena o 0.l a me 1.0μM.
b.ʻO ka ʻimi noiʻi ʻana: ʻO ka hui ʻimi noiʻi e pili ana i ka ʻokoʻa ʻokoʻa o ka pūʻulu fluorescent probe multix, ma muli o ke kūlana ʻoi aku ka maikaʻi o ka ʻimi noiʻi ma waena o 0.05 a me 0.5μM.
c.ʻO ka hoʻoheheʻe ʻana i ka template: ʻO ka qPCR ka mea maʻalahi a makemake ʻia e dilute i ka template.He kūpono ka mana Ct ma waena o 20 a me 35.
d.ʻO ka hoʻomākaukau ʻana o ka ʻōnaehana: E ʻoluʻolu e hoʻomākaukau i ka papa hana maʻemaʻe ultra, a me ka pipettor a me ka paipu hopena me ka ʻole o ke koena nuclease;ua paipai ʻia e hoʻohana i ke poʻo pū me ka mea kānana.Hōʻalo i ka hoʻohaumia kea a me ka hoʻohaumia aerosol.
2. Hoʻoholo PaikikalaKūkākūkā
| Kaapuni ʻanuʻu | Temp. | Manawa | Nā pōʻaiapuni |
| Hoʻihoʻi i ka palapala | 50 ℃a | 20 min | 1 |
| Hoʻomaka-denaturation | 95 ℃ | 5 min | 1 |
| Pane hoʻonui | 95 ℃ | 15 sec |
40-45 |
| 60 ℃ b | 30 sec c |
Nā memo:
a.Hoʻololi i ka palapala: Hiki ke koho i ka mahana he 42°C a i ʻole 50°C.
b.Pane hoʻonui: Hoʻoponopono ʻia ka mahana e like me ka waiwai Tm o nā kumu mua i hoʻolālā ʻia.
c.Loaʻa ka hōʻailona Fluorescence: E ʻoluʻolu e hoʻonohonoho i ke kaʻina hana hoʻokolohua e like me nā koi o ka manual mea kani.
Nā memo
E ʻoluʻolu e ʻaʻahu i ka PPE pono, e like me ka lole lab a me nā mīkina lima, e hōʻoia i kou olakino a palekana.
