Multiplex qPCR Probe Premix
Helu popoki: HCB5051A
ʻO TaqMan multiplex qPCR Master Mix (Dye Based) kahi hoʻonā mua no 2 × hoʻonui nui PCR i ka manawa maoli i hōʻike ʻia e ka naʻau kiʻekiʻe a me ka kikoʻī, ʻo ia ka uliuli i ke kala, a loaʻa ka hopena o ka hoʻohui ʻana.ʻO kēia huahana he 2× Mix pre-mixed reagent e hiki ai i ʻehā fluorescent quantitative PCR reactions i hoʻokahi hopena maikaʻi.Aia i loko o kēia huahana ke ʻano antibody i hoʻololi ʻia i ka hoʻomaka wela Taq enzyme, e hoʻomaikaʻi nui i ka naʻau a me ka kikoʻī.I ka manawa like, ua hoʻonui nui kēia huahana i ka multi-reaction buffer, hiki ke hoʻomaikaʻi i ka hoʻonui ʻana i ka pono o ka hopena a hoʻoikaika i ka hoʻonui pono ʻana o nā template haʻahaʻa haʻahaʻa.Hiki ke hoʻohana ʻia kēia huahana no ka genotyping and multiplex quantitative analysis.
Hōʻike
Hoomaka Wela | Hoʻomaka wela i kūkulu ʻia |
ʻAno ʻike | ʻO ka ʻike maka mua |
ʻano PCR | qPCR |
Polymerase | Taq DNA polymerase |
ʻAno hāpana | DNA |
Nā Kūlana Waihona
Hoʻouna ʻia ka huahana me ka hau maloʻo a hiki ke mālama ʻia ma -25 ~ -15 ℃ no 2 makahiki.
Nā kuhikuhi
1. PanePūnaehana
Nā ʻāpana | Volume (μL) | Hoʻopaʻa hope |
2× TaqMan multiplex qPCR Master Mix | 12.5 | 1× |
Huina mua (10 μmol/L) a | × | 0.1 - 0.5 μmol/L |
Hui ʻimi ʻimi (10 μmol/L)b | × | 50 - 250 nmol/L |
Rox reference dye | 0.5 | 1× |
DNA/cDNA | 1-10 | - |
ddH2O | a hiki i ka 25 | - |
Nā memo:E hui pono ma mua o ka hoʻohana ʻana i mea e pale aku ai i nā ʻōhū nui mai ka haʻalulu ikaika.
a.ʻO ka manaʻo kumu: Loaʻa i ka Primer Mix nā pālua o nā kumu mua, ʻo ka maʻamau kēlā me kēia kumu mua i ka ʻike hope loa o 0.2 μmol/L a hiki ke hoʻololi ʻia ma waena o 0.1 a me 0.5 μmol/L e like me ke kūpono.
b.ʻO ka ʻimi noiʻi: Loaʻa i ka Probe Mix nā ʻimi he nui me nā hōʻailona fluorescence ʻokoʻa, a hiki ke hoʻoponopono ʻia ke ʻano o kēlā me kēia probe ma waena o 50 a me 250 nmol/L e like me ke kūlana kikoʻī.
1.Rox dye reference: Hoʻohana ʻia ia ma ka mea hana hoʻonui PCR Real Time e like me Applied Biosystems e hoʻoponopono i ka hewa o ka hōʻailona fluorescence i hana ʻia ma waena o nā luawai;ʻAʻole i loaʻa i kēia huahana kahi kuhikuhi Rox dye.Paipai ʻia ʻo Cas#10200 inā pono.
2.ʻO ka hoʻoheheʻe ʻana i ka template: ʻO ka qPCR ka mea maʻalahi loa, a ua manaʻo ʻia e hoʻoheheʻe i ka template no ka hoʻohana ʻana.Inā he cDNA stock solution ka la'ana, 'a'ole pono e oi aku ka nui o ka template ma mua o 1/10 o ka huina nui.
3.Pūnaehana pane: 25μL, 30μL a i ʻole 50 μL e ʻōlelo ʻia e hōʻoia i ka pono a me ka hoʻihoʻi hou ʻana o ka hoʻonui ʻana i ke ʻano.
4.Hoʻomākaukau ʻōnaehana: E ʻoluʻolu e hoʻomākaukau i loko o ka papa hoʻomaʻemaʻe super, a hoʻohana i nā ʻōlelo aʻoaʻo a me nā paipu pane ʻole me ke koena nuclease;ua paipai ʻia e hoʻohana i nā ʻōlelo aʻoaʻo me nā pahu kānana.Hōʻalo i ka hoʻohaumia kea a me ka hoʻohaumia aerosol.
2.Papahana pane
Kaʻina kaʻapuni | Temp. | Manawa | Nā pōʻaiapuni |
Hoʻomaka-denaturation | 95 ℃ | 5 min | 1 |
Denaturation | 95 ℃ | 15 sec | 45 |
Hoʻopili/Hoʻonui | 60 ℃ | 30 sec |
Nā memo:
1.Hoʻopili/Hoʻonui: Hiki ke hoʻololi pono ʻia ka mahana a me ka manawa e like me ke kumu waiwai Tm i hoʻolālā ʻia.
2.Loaʻa ka hōʻailona fluorescence: He ʻokoʻa ka manawa e loaʻa ai ka hōʻailona fluorescence no nā mea hana ʻike qPCR like ʻole, e ʻoluʻolu e hoʻonohonoho e like me ka palena manawa liʻiliʻi.Hoʻonohonoho ʻia ka manawa o kekahi mau mea kani maʻamau penei:
20 sec: Applied Biosystems 7700, 7900HT, 7500 wikiwiki
31 sec: Applied Biosystems 7300
32 sec: Applied Biosystems 7500
Nā memo
E ʻoluʻolu e ʻaʻahu i ka PPE pono, e like me ka lole lab a me nā mīkina lima, e hōʻoia i kou olakino a palekana!