SYBR GREEN qPCR Premix (Puliuli)

Helu popoki: HCB5041B

ʻO Universal Blue qPCR Master Mix (Dye Based) he hoʻonā mua no ka 2×real-time quantitative PCR amplification i hōʻike ʻia e ka ʻike kiʻekiʻe a me ka kikoʻī, he uliuli ke kala, a loaʻa ka hopena o ka hoʻohui ʻana i ka laʻana.Hoʻohana ka ʻāpana koʻikoʻi ʻo Taq DNA polymerase i ka hoʻomaka wela antibody e pale pono i ka hoʻonui ʻole kikoʻī ma muli o ka annealing primer i ka wā hoʻomākaukau laʻana.I ka manawa like, hoʻohui ke kumu i nā mea hoʻoikaika e hoʻomaikaʻi i ka hoʻonui ʻana o ka hopena PCR a hoʻohālikelike i ka hoʻonui ʻana o nā genes me nā ʻokoʻa GC like ʻole (30 ~ 70%), i hiki ai i ka PCR quantitative ke loaʻa kahi pilina laina maikaʻi ma kahi ākea ākea. māhele ʻāina.Loaʻa i kēia huahana kahi ROX Passive Reference Dye kūikawā, pili i ka hapa nui o nā mea hana qPCR.ʻAʻole pono e hoʻoponopono i ka manaʻo o ROX ma nā mea kani like ʻole.Pono wale e hoʻohui i nā primers a me nā templates e hoʻomākaukau i ka ʻōnaehana pane no ka amplification.

Nā ʻāpana

Hui Pū ʻia ʻo Universal Blue qPCR Master

Nā kūlana mālama

Hoʻouna ʻia ka huahana me nā ʻeke hau a hiki ke mālama ʻia ma -25 ℃ ~ -15 ℃ no 18 mau mahina.Pono e pale aku i ka irradiation māmā ikaika i ka wā e mālama ai a hoʻomākaukau paha i ka ʻōnaehana hopena.

Hōʻike

Nā kuhikuhi

1.Reaction System

[Nānā]: Hoʻohui maikaʻi ma mua o ka hoʻohana ʻana i mea e pale aku ai i nā ʻōpū nui mai ka haʻalulu ikaika.

a) ʻO ke kumu kumu: ʻO 0.2μmol / L ka hopena hope loa, a hiki ke hoʻololi ʻia ma waena o 0.1 a me 1.0μmol / L e like me ke kūpono.

b) Ka manaʻo hoʻohālikelike: Inā ʻaʻole i hoʻoheheʻe ʻia ka waihona cDNA stock solution, ʻaʻole pono ka leo i hoʻohana ʻia ma mua o 1/10 o ka nui o ka nui o ka pane qPCR.

c) Ka hoʻoheheʻe ʻana i ka template: Manaʻo ʻia e hoʻoheheʻe i ka hoʻonā waihona cDNA ma 5-10 mau manawa.ʻOi aku ka maikaʻi o ka nui o ka hoʻohui ʻia ʻana inā ʻo ka waiwai Ct i loaʻa ma ka hoʻonui ʻana he 20-30 mau pōʻai.

d) Pūnaehana pane: Manaʻo ʻia e hoʻohana i ka 20μL a i ʻole 50μL e hōʻoia i ka pono a me ka hoʻihoʻi hou ʻana o ka hoʻonui ʻana i ka gene.

e) Ka hoʻomākaukau ʻana i ka ʻōnaehana: E ʻoluʻolu e hoʻomākaukau i loko o ka papa hoʻomaʻemaʻe maʻemaʻe a hoʻohana i nā ʻōlelo aʻoaʻo a me nā paipu pane ʻole me ke koena nuclease;ua paipai ʻia e hoʻohana i nā ʻōlelo aʻoaʻo me nā pahu kānana.Hōʻalo i ka hoʻohaumia kea a me ka hoʻohaumia aerosol.

2.Papahana pane

Papahana maʻamau

Polokalamu wikiwiki

[Nānā]: Ua kūpono ka papahana wikiwiki no ka hapa nui o nā genes, a hiki ke hoʻāʻo ʻia nā papahana maʻamau no nā ʻano genes paʻakikī paʻakikī.

a) Ka mahana a me ka manawa hoʻohui: E ʻoluʻolu e hoʻololi e like me ka lōʻihi o ka primer a me ka gene target.

b) Loaʻa ka hōʻailona Fluorescence (★): E ʻoluʻolu e hoʻonohonoho i ke kaʻina hana hoʻokolohua e like me nā koi i nā kuhikuhi no ka hoʻohana ʻana i ka mea kani.

c) Ka hoohehee: Hiki ke hoʻohana maʻamau ka polokalamu paʻamau.

3. Nānā Hua 

Ua koi ʻia ka liʻiliʻi o ʻekolu mau hoʻopiʻi biological no nā hoʻokolohua quantitative.Ma hope o ka pane ʻana, pono e hōʻoia i ka pihi hoʻonui a me ka hoʻoheheʻe ʻana.

3.1 Pipi hoʻonui:

ʻO ka pihi hoʻonui maʻamau he ʻano S.ʻOi aku ka pololei o ka nānā ʻana i ka nui ke hāʻule ka waiwai Ct ma waena o 20 a me 30. Inā emi ka waiwai Ct ma mua o 10, pono ia e hoʻoheheʻe i ke kumu a hoʻokō hou i ka hoʻāʻo.Aia ka waiwai Ct ma waena o 30-35, pono e hoʻonui i ka manaʻo hoʻohālikelike a i ʻole ka nui o ka ʻōnaehana pane, i mea e hoʻomaikaʻi ai i ka hoʻonui ʻana a me ka hōʻoia i ka pololei o ka nānā ʻana i ka hopena.Ke ʻoi aku ka nui o ka waiwai Ct ma mua o 35, ʻaʻole hiki i nā hopena hoʻāʻo ke nānā i ka helu ʻana i ka ʻōlelo o ke ʻano, akā hiki ke hoʻohana ʻia no ka loiloi qualitative.

3.2 Ka pio hehee:

Hōʻike ka piko hoʻokahi o ka pihi hoʻoheheʻe i ka maikaʻi o ka kikoʻī o ka hopena a hiki ke hana ʻia ka loiloi quantitative;inā ʻike ʻia ka piko hoʻoheheʻe ʻelua a i ʻole ka nui o nā piko, ʻaʻole hiki ke hoʻokō ʻia ka loiloi quantitative.Hōʻike ka ʻeke hoʻoheheʻe i nā peaks pālua, a he mea pono e hoʻoholo inā he dimer primer a i ʻole ka hoʻonui kikoʻī ʻole e ka DNA agarose gel electrophoresis.Inā he dimer primer, pono ia e hoʻemi i ka manaʻo kumu a i ʻole e hoʻolālā hou i nā primers me ka hoʻonui kiʻekiʻe.Inā he hoʻonui ʻole ia, e ʻoluʻolu e hoʻonui i ka mahana annealing, a i ʻole e hoʻolālā hou i nā primers me ka kikoʻī.

Nā memo

E ʻoluʻolu e hoʻokomo i ka PPE pono, e like me ka lole lab a me nā mīkina lima, e hōʻoia i kou olakino a palekana！

ʻO kēia huahana no ka noiʻi WALE!