Rnase A
ʻO Ribonuclease A(RNaseA) kahi polypeptide i hoʻopaʻa ʻia me 4 mau paʻa disulfide me ke kaumaha molekala ma kahi o 13.7 kDa.ʻO RNase A he endoribonuclease e hoʻohaʻahaʻa pono i ka RNA kaula hoʻokahi ma nā koena C a me U.ʻO ke kikoʻī, ʻike ka cleavage i ka paʻa phosphodiester i hoʻokumu ʻia e ka 5'-ribose o kahi nucleotide a me ka hui phosphate ma ka 3'-ribose o ka pyrimidine nucleotide e pili ana, i hydrolyzed ka 2,3'-Cyclic phosphates i ka 3 pili. 'nucleoside phosphates (e like me, pG-pG-pC-pA-pG ua hoʻokaʻawale ʻia e RNase A e hoʻohua i ka pG-pG-pCp a me A-PG).ʻO RNase A ka mea ikaika loa i ka hoʻokaʻawale ʻana i ka RNA kaula hoʻokahi.ʻO ka manaʻo hana manaʻo ʻia ʻo 1-100 μG/mL, kūpono me nā ʻōnaehana like ʻole.Hiki ke hoʻohana ʻia ka paʻakai haʻahaʻa (0-100 mM NaCl) no ka ʻoki ʻana i ka RNA kaula hoʻokahi, ka RNA pālua, a me nā kaulahao RNA i hana ʻia e ka RNA-DNA hybridization.
Eia nō naʻe, ma ka paʻakai kiʻekiʻe (≥0.3 M), ʻo RNase A wale nō e hoʻokaʻawale i ka RNA kaula hoʻokahi.
Hoʻohana pinepine ʻia ʻo RNase A e wehe i ka RNA i ka wā o ka hoʻomākaukau ʻana i ka plasmid DNA a i ʻole genomic DNA.ʻO ka hana a DNase paha i ka wā o ka hoʻomākaukau ʻana hiki ke hoʻopili maʻalahi i ka hopena.Hiki ke hoʻohana ʻia ke ʻano kuʻuna o ka paila ʻana i ka ʻauʻau wai e hoʻopau i ka hana DNase.ʻAʻole loaʻa i kēia huahana ka DNase a me ka protease, a ʻaʻole koi i ka mālama wela ma mua o ka hoʻohana ʻana.Eia kekahi, hiki ke hoʻohana ʻia kēia huahana i nā hoʻokolohua molecular biology e like me ka nānā ʻana i ka pale ʻana o RNase a me ka nānā ʻana i ke kaʻina RNA.
Nā kūlana mālama
Pono e mālama ʻia ka huahana ma -25 ℃ ~ - 15 ℃ no 2 mau makahiki.
Nā kikoʻī
| Ka nana aku | Pauda |
| Ka nui | 100mg / 1g |
| ʻAno huahana | ʻO RNase A |
Nā kuhikuhi
ʻO kēia kekahi o nā ala maʻamau no ka hoʻomākaukau ʻana i ka hoʻonā mālama mālama RNase A.Hiki ke hoʻomākaukauma nā ʻano hana ʻē aʻe e like me nā ʻano kuʻuna i loko o ka hale hana a i ʻole nā palapala kuhikuhi (e like mehoʻoheheʻe pololei ʻia i 10 mM Tris-HCl, pH 7.5 a i ʻole Tris-NaCl solution)
1. E hoʻohana i ka 10 mM sodium acetate (pH 5.2) no ka hoʻomākaukau ʻana i ka 10 mg/mL o RNase A waihoʻoluʻu.
2. Hoʻomaʻamaʻa ma 100 ℃ no 15 min.
3. Hoʻolili i ka lumi wela, hoʻohui i ka 1/10 volume o 1 M Tris-HCl (pH 7.4), hoʻoponopono i kona pH i 7.4 (no ka mea.laʻana, e hoʻohui i 500 mL o 10 mg/mL RNase hoʻoheheʻe mālama 1 M Tris-HCl, pH7.4).
4. Sub-packaged ma -20 ℃ no ka mālama ʻana i ka hau, hiki ke paʻa a hiki i 2 mau makahiki.
[Memo]:
I ka hoʻolapalapa ʻana i ka solution RNaseA ma lalo o nā kūlana kūʻokoʻa, e hoʻokumu ʻia ka ua o RNase;E hoʻolapalapa iā ia ma kahi pH haʻahaʻa, a inā he ua, hiki ke ʻike ʻia, hiki ke kumu ma muli o ka loaʻa ʻana o nā haumia protein.Inā loaʻa ka sediment ma hope o ka hoʻolapalapa ʻana, hiki ke hoʻoneʻe ʻia nā mea haumia e ka centrifugation kiʻekiʻe (13000rpm), a laila hoʻopiha piha ʻia no ka waiho ʻana i ka hau.
Nā memo
E ʻoluʻolu e ʻaʻahu i ka PPE pono, e like me ka lole lab a me nā mīkina lima, e hōʻoia i kou olakino a palekana.
