prou
Nā huahana
Rnase assay Kit (Fluorescence) HCP0035A Kiʻi Manaʻo
  • Rnase assay Kit (Fluorescence) HCP0035A

Kiko hōʻike Rnase (Fluorescence)


Helu popoki:HCP0035A

Pūʻolo: 48T/96T

Hoʻokumu ʻia ka pahu ʻike RNase ma kahi hōʻailona RNA i hōʻailona ʻia i ka fluorophore.

Hōʻike huahana

ʻikepili huahana

Hoʻokumu ʻia ka pahu ʻike RNase ma kahi hōʻailona RNA i hōʻailona ʻia i ka fluorophore.Ke loaʻa ʻole ka hana RNase i ka hāpana, paʻa ka probe a ʻaʻole hoʻopuka i kahi hōʻailona fluorescent;ke loaʻa ka hana RNase i ka hāpana, hoʻohaʻahaʻa ʻia ka ʻimi noiʻi, ka hopena i kahi hōʻailona fluorescence i hoʻonui ʻia;ʻO ka nui o ka piʻi ʻana o ka hōʻailona fluorescence e pili pono me ka helu a me ka hana o nā enzymes.E hoʻohana i ka mea heluhelu microplate fluorescence e ana i ka nalu nalu o ex/em=535/575nm e hoʻoholo ai inā ua haumia ka hāpana e RNase.


  • Mua:
  • Aʻe:

  • Palapala noi

    Hoʻohana ʻia kēia kit e ʻike i ka haumia RNase i nā laʻana.

     

    Cnā mea hoʻokūkū

    inoa

    HCP0035A-01

    (192T)

    HCP0035A-02

    (48T)

    10× hoʻonā hopena

    2.0mL

    0.5mL

    ʻimi RNA

    1 paipu

    1 paipu

    TE pale

    2.0mL

    0.5mL

    RNase A maʻamau (10mg/mL)

    20μL

    10μL

    Paʻa hoʻoheheʻe maʻamau

    12mL

    6mL

    DNase&RNase wai ʻole

    25mL

    25mL

    DNase RNase

    50mL

    50mL

     

    Ka mālama ʻana a me ke kūpaʻa

    1. Lawe ʻia ma -25 ~ - 15 ℃;

    2.Hoʻokaʻawale ʻia nā ʻāpana like ʻole o ka kit e like me ka mahana:

    inoa

    mahana wela

    10× hoʻonā hopena

    -25 ~ – 15 ℃

    ʻimi RNA

    -25 ~ – 15 ℃

    TE pale

    -25 ~ – 15 ℃

    RNase A maʻamau (10mg/mL)

    -25 ~ – 15 ℃

    Paʻa hoʻoheheʻe maʻamau

    -25 ~ – 15 ℃

    DNase&RNase wai ʻole

    -25 ~ 30 ℃

    DNase RNase

    2 ~ 30 ℃

    3. E mālama i ka pahu i wehe ʻole ʻia no 12 mahina.

    4.E mālama i ka pahu no 6 mahina ma hope o ka wehe ʻana.Manaʻo ʻia e hoʻokaʻawale i ka solution probe RNA e like me ka nui o ka hoʻohana hoʻokahi e pale aku i ka māmā a me ka hoʻoheheʻe pinepine ʻana a me ka hoʻoheheʻe ʻana.

     

    Pono nā lako a me nā mea hoʻohana

    1.ʻO ka mea heluhelu microplate fluorescence (me ex/em=535/575nm ka lōʻihi hawewe)

    2. DNase&RNase-ʻole pipettes a me nā ʻōlelo aʻoaʻo

    3. DNase&RNase-noa EP paipu

    4. DNase&RNase-free ʻeleʻele non-transparent 96-well pā

    Ka hoʻomākaukau ʻana i ka reagent

    1.Wehe i ka pahu a hoʻohālikelike i ka mahana wela (18 ~ 25 ℃), lulu a hoʻohui i nā mea e like me 10x reaction solution, TE buffer, RNase A standard (10mg/mL), Standard Dilution Buffer, a laila centrifuge koke.(Centrifuge ma 4000~7000rpm no 10 kekona).

     2. Centrifuge i ka RNA probe ma 4000 ~ 7000rpm no 60 kekona e ohi ia i ka lalo o ka paipu, akahele wehe i ka paipu pāpale, a hoʻohui i 40μL TE paʻa e hoʻoheheʻe e like me ka RNA probe waihona hoʻonā, aliquot ka RNA probe waiho hoʻonā. i ka nui hoʻohana hoʻokahi a mālama iā lākou ma -25 ~ -15 °C e pale i ka maloʻo hou a me ka hoʻoheheʻe ʻana.Wehe i ka hoʻonā hoʻopaʻa ʻimi noiʻi i kēlā me kēia manawa āu e hoʻāʻo ai, e hoʻoheheʻe iā ia i 50 mau manawa me TE buffer (no ka laʻana, hoʻohui i 490μL TE buffer i loko o 12μL RNA probe) e like me ka RNA probe working Solution.E mālama i ke koena o ka RNA probe working Solution ma-25 ~ -15 °C no ka pale ʻana i ka māmā a me ka hoʻoheheʻe hou ʻana a me ka hoʻoheheʻe ʻana.

     

    Nā ʻanuʻu ʻike

    1. E hoʻonohonoho i ka loaʻa kūpono ma mua o ka hoʻāʻo mua, e pale i ka pilikia o ka nalowale o ka naʻau a i ʻole ka oversaturation hōʻailona.

    1) nā ʻāpana mea kani:

    E lulu ana i ka pā 10~ 15s ma mua o ka ʻike ʻana;

    Ka lōʻihi hawewe λEx=535nm;

    Ka lōʻihi hawewe λEm=575nm;

    E hoʻohana i ka hana loaʻa aunoa;

    Ka wela 37 ℃;

    ʻAno hope.

    E hoʻonoho i ka loaʻa i ka unahi-aunoa inā hiki, e hoʻohana i kahi hoʻonohonoho waiwai waena ma mua.

    Nānā: ʻaʻole kūlike ke ʻano hoʻonohonoho o nā mea kani like ʻole, e ʻoluʻolu e nīnau i ka mea hoʻolako mea hana no nā kikoʻī.

    2) E koho i 2 luawai ma ka 96-well plate, e hookomo i ka 10μL RNA probe working solution a me 10μL 10×rection solution i kela punawai;

    3) E hoʻohui i 80μL o DNase&RNase-noa wai i hoʻokahi punawai, a hoʻohui i 79μL o DNase&RNase-noa wai a me 1μL RNase A maʻamau (100mg/mL) i kekahi luawai.

    4) E kau i ka pā ma kahi pōʻeleʻele ma 37 ° C a hoʻāʻo iā ia ma hope o 30 mau minuke.

    5) Inā hoʻonoho i ka loaʻa i ka autoscale, e hōʻike ʻia ka waiwai loaʻa ma ka pae ʻāpana mea hana o ka faila data, i kapa ʻia ʻo G1.

    6) I ka hoʻohana ʻana i kahi hoʻonohonoho ʻana i ka loaʻa waena, pono e hoʻomaopopo ʻia: inā ʻoi aku ka nui o ka fluorescence kiʻekiʻe ma mua o ka palena o luna o ka mea kani, pono e hoʻemi ʻia ka waiwai loaʻa;inā ʻoi aku ka nui o ka fluorescence kiʻekiʻe ma lalo o ka palena kiʻekiʻe o ka mea hana, pono e hoʻonui ʻia ka waiwai loaʻa;ʻO ka hope, loaʻa ka waiwai waiwai kūpono, i kapa ʻia ʻo G2.

    2. Sa me nā ʻāpana mea kani:

    E lulu ana i ka pā 10~ 15s ma mua o ka ʻike ʻana;

    Ka lōʻihi o ka hawewe λEx=485nm;

    Ka lōʻihi hawewe λEm=525nm;

    E hoʻonoho i ka waiwai loaʻa iā G1 a i ʻole G2 i loaʻa i ka step1;

    Ka wela 37 ℃;

    Inā kākoʻo ka mea heluhelu microplate i ke ʻano kinetic, pono ia e hoʻohana i ke ʻano ʻike kinetic, me ka manawa o 1 a 1.5 mau minuke, a ʻo ka manawa holoʻokoʻa he 30 mau minuke.

    3.Hoʻomākaukau laʻana

    ʻO ka nui o ka laʻana i manaʻo ʻia he 80μL.Inā ʻoi aku ka liʻiliʻi o ka hāpana e hoʻāʻo ʻia ma mua o 80μL, e hoʻoheheʻe i 80μL me ka wai ʻole DNase&RNase.

    I ka wā e hoʻāʻo ʻia ai nā mea e hoʻopili ai i ka luminescence o ka fluorophore (e like me nā ʻoluʻolu ʻeleʻele, nā mea viscous kiʻekiʻe a i ʻole surfactants), pono e hoʻoheheʻe ʻia ka hāpana me ka wai ʻole DNase & RNase, akā e ʻoluʻolu e hoʻopili ka hana dilution. ka manao.No ka hoʻāʻo ʻana o ka laʻana i loaʻa nā mea hoʻokae hana RNase (e like me nā haʻina ikaika ionic kiʻekiʻe, pH<4 a i ʻole pH>9 buffers, protein denaturants, etc.), ʻo ka hopena o ke ana ʻana ʻo ka hana enzyme holoʻokoʻa o ka hāpana hāpana, ʻaʻole ka ka hana pilikino o ka enzyme.

     

    E hoʻoheheʻe i ka maʻamau DNase I (10mg/mL) me ka Dilution Buffer maʻamau penei: 

    ʻAʻole.

    kaʻina hoʻomākaukau

    Hoʻopaʻa

    1

    2μL RNase A maʻamau + 198μL Maʻamau Dilution Buffer

    0. 1mg/mL

    2

    2μL No

    1× 10-3mg/mL

    3

    2μL No. 2 hāpana + 198μL Maʻamau Dilution Buffer

    1× 10-5mg/mL

    4

    2μL No. 3 hāpana + 198μLSstandard Dilution Buffer

    1× 10-7mg/mL

    5

    100μL No. 4 hāpana + 100μL Maʻamau Dilution Buffer

    5× 10-8mg/mL

     E hoʻoheheʻe i ka hāpana No. 5 me ka wai ʻole DNase&RNase no 10 mau manawa:

    6

    20μL No. 5 hāpana + 180μL DNase & RNase-noa wai

    5× 10-9mg/mL,

    5pg/mL

    Hoʻohana ʻia ka helu 6 ma ke ʻano he mana maikaʻi;Hoʻohana ʻia ka wai ʻole DNase&RNase ma ke ʻano he mana maikaʻi ʻole.

    4.Dosing a ho'āʻo

    1) E hoʻohui i ka hopena hana 10μL RNA probe a me 10μL 10 × Reaction solution i ka pā 96-well.E koho i 4 luawai e hoohui i ka mana ino a me ka mana maikai, a me na luawai e ae e hoohui i na laana e hoao.He 2 mau luawai no kela la'ana, 80μL no kela luawai;

    2) E ho'āʻo koke a heluhelu i ka waiwai hōʻailona fluorescence RFU0 no 0min.Ma hope o ka waiho ʻana i ka pōʻeleʻele ma 37 ℃ no 30min, e hoʻāʻo a heluhelu hou i ka waiwai hōʻailona fluorescence RFU30 no 30min hou.Inā hoʻohana ʻia ke ʻano hoʻoikaika, hiki ke heluhelu ʻia nā hōʻailona fluorescence āpau no 0 ~ 30min.

     

    Ka wehewehe ʻana i nā hopena hoʻāʻo

    Inā ʻo RFU30≥2×RFU0, manaʻo ʻia ua haumia ka hāpana e hoʻāʻo ʻia e RNase.

    'Ōlelo Aʻo: inā ua haumia nui ka laʻana e hoʻāʻo ʻia a loaʻa paha nā mea hoʻopilikia, hiki mai paha ʻo RFU0 (kahi laʻana e hoʻāʻo ʻia) > RFU0 (ka mana maikaʻi maikaʻi) a me RFU30 (kahi laʻana e hoʻāʻo ʻia) < 2 × RFU0 (kahi laʻana e hoʻāʻo ʻia) hoʻāʻo ʻia), alakaʻi i ka hoʻoholo hewa hewa.I kēia manawa, e hoʻoheheʻe ʻia ka hāpana e hoʻāʻo ʻia me ka wai ʻole DNase&RNase, a laila hoʻāʻo.

     

    ʻIke nui

    Ke hoʻohaumia ʻia ka laʻana e hoʻāʻo ʻia a pono e hoʻoholo i ka waiwai o ka RNase i loko o ka hāpana, hiki ke hoʻoholo ʻia ma o nā kaʻina hana:

     

    E hoʻoheheʻe i ka RNase A maʻamau (10mg/mL) me ka Dilution Buffer maʻamau penei:

    ʻAʻole.

    Kaʻina hoʻomākaukau

    hoʻopaʻa ʻana

    1

    2μL RNase A maʻamau + 198μL Maʻamau Dilution Buffer

    0. 1mg/mL

    2

    2μL No

    1×10-3mg/mL

    3

    2μL No. 2 hāpana + 198μL Maʻamau Dilution Buffer

    1×10-5mg/mL

    4

    2μL No. 3 hāpana + 198μL Maʻamau Dilution Buffer

    1×10-7mg/mL

    5

    100μL No.4 laʻana + 100μL Maʻamau Dilution Buffer

    5×10-8mg/mL

    6

    100μL No.5 laʻana + 100μL Maʻamau Dilution Buffer

    2.5×10-8mg/mL

    7

    100μL No. 6 laʻana + 100μL Maʻamau Dilution Buffer

    1.25×10-8mg/mL

    8

    100μL No. 7 hāpana + 100μL Maʻamau Dilution Buffer

    6.25×10-9mg/mL

    9

    100μL No. 8 laʻana + 100μL Maʻamau Dilution Buffer

    3. 125×10-9mg/mL

    A laila e hoʻoheheʻe i ka helu 6 ~ No. 9 me ka wai ʻole DNase & RNase no 10 mau manawa:

    10

    20μLNo.6 laʻana + 180μL DNase & RNase-noa wai

    2.5×10-9mg/mL

    11

    20μL No. 7 laʻana + 180μL DNase&RNase-noa wai

    1.25×10-9 mg/mL

    12

    20μL No. 8 laʻana + 180μL DNase&RNase-ʻole wai

    6.25×10- 10 mg/mL

    13

    20μL No. 9 laʻana + 180μL DNase&RNase-noa wai

    3. 13×10- 10 mg/mL

     

    ʻO ka helu 10 ~ No.DNase & RNase wai ʻole ma ke ʻano he laʻana 0-concentration.

    E ho'āʻo i ka laʻana 0-concentration, nā maʻamau a me ka laʻana haumia e like me nā ʻanuʻu ʻike e loaʻa iā RFU0 a me RFU30.

     

    E helu i ka ∆RFU = RFU30-RFU0, e lawe i ka ∆RFU (0 ka hoʻonaʻauao) a me ka ∆RFU (maʻamau) ma ke ʻano he ordinate a me RNase ka hoʻopaʻa ʻana o ka maʻamau e like me ka abscissa (0 ka hoʻopaʻa ʻana he 0), e hoʻokō i ka laina laina, a e helu i ka hoʻohālikelike kūpono y = ax + B, a he ≥ 0.99 ka huina hooponopono r.E lawe mai i ka ∆RFU (mea hoʻohaumia) i loko o ka hoohalike e like me y, e helu i ka x, a e hoonui ia me ka mea hoʻoheheʻe ma mua o ka hoʻoheheʻe ʻia ʻana no ka loaʻa ʻana o ke kumu kūʻai o ka hāpana haumia.

    'Ōlelo Aʻo: Ma muli o ka loli o ka hōʻailona mea kani, hiki i ka ∆RFU<0, i kēia manawa, ua helu ʻia ʻo ∆RFU=0.

     

    Hana ʻike

    1. Ka palena ʻike: RNase A: 0.313pg/mL,~ 1.56×10-9U/μL

    2.ʻO ka pololei: ka helu helu o ka hoʻololi ʻana ≤ 10%, ka helu hoʻololi o waena o ka hoʻololi ≤ 15%

     

    Nānā

    1. Pono e wikiwiki ka hana hoʻohui ʻana i ka hāpana.ʻO ka lōʻihi loa e pili ana i ka pololei o ka hoʻokolohua.

    2. ʻOkoʻa nā ʻāpana o nā mea hana lepili enzyme fluorescent like ʻole.E hoʻonohonoho i ka loaʻa kūpono ma mua o ka hoʻāʻo mua.

    3. E hoʻoluliluli piha ʻia nā reagents a pau ma mua o ka hoʻohana ʻana.I ka hoʻohui ʻana i nā laʻana, e hoʻohui ʻia nā laʻana i hoʻohui ʻia i lalo o ka paʻa lepili enzyme e pale ai i ka hoʻohui ʻana iā lākou i ka ʻaoʻao o luna o ka pā luawai.I ka hoʻohui ʻana i nā laʻana, e noʻonoʻo ʻaʻole e paʻi a hoʻopuka i nā ʻōhū.

    4. ʻO ka maʻamau i loko o ka kit ʻo RNase A, a ua wehewehe ʻia kāna ʻāpana hana he hoʻokahi ʻāpana o ka enzyme e hoʻonui i ka absorbance o 1.0 ma 260 nm ke hoʻoheheʻe ʻia ka RNA hū ma 37 °C a me ka pH 5.0 [1].He kanalima mau ʻāpana e like me ka 1 Kunitz unit[2].

    5.I mea e pale aku ai i ka haumia ʻo RNase exogenous, hiki ke hoʻolei ʻia ʻo DNase RNase ma ka ʻili o ka papa hoʻokolohua, nā mīkina lima a me nā mea ʻē aʻe.Ma hope o 5 mau minuke, e hoʻomaʻemaʻe iā lākou me nā kāwele pepa maʻemaʻe a laila e hana i nā hana hoʻokolohua ma hope.

     

     

     

    E kākau i kāu leka ma aneʻi a hoʻouna mai iā mākou